Fa'ata'ita'iga Fa'avae ole Akaraose Gel Electrophoresis(2)

Sauniuniga Faataitai mautaina

Ona o le faʻaaogaina o se faʻaogaina faʻaauau e aunoa ma le faʻapipiʻiina o gel i le tele o tulaga, o faʻataʻitaʻiga e tatau ona i ai se faʻatonuga talafeagai ma se volume itiiti. Fa'aoga apaipae faʻaopoopo lemu le faʻataʻitaʻiga, faʻatasi ai ma le 5-10 μg i le vaieli, e aloese ai mai se faʻaititia tele i le faʻaiuga. O afeauta fa'ata'ita'iga, e tatau ona tape le eletise. O le fa'ata'ita'iga e tatau ona i ai se vali fa'ailoga (0.025% bromophenol blue po'o moli) ma le sucrose (10-15%) po'o le glycerol (5-10%) e fa'ateleina ai lona mamafa, fa'atumauina le fa'ata'ita'iga, ma puipuia le fa'asalalauina. Ae ui i lea, o nisi taimi o le sucrose poʻo le glycerol e mafai ona mafua ai fusi faʻa-U i taunuuga o le electrophoresis, lea e mafai ona aloese mai le faʻaaogaina o le 2.5% Ficoll (polyvinylpyrrolidone).

Electrophoresis

Ole voltage mo electrophoresis e 5-15 V/cm, masani ile 10 V/cm. Mo le vavaeeseina o mole lapopoa, e tatau ona maualalo le voltage, e masani lava e le sili atu i le 5 V / cm.

Fa'ailogaina

E masani ona fa'aogaina le felanulanua'i felanulanua'i ethidium bromide (EB) mo le valiina e mata'ituina ai fusi DNA i le gel agarose. E mafai e le EB ona fa'aofi i le va o pa'aga autu o mole mole DNA, ma mafua ai ona fusifusia le EB ma DNA. O le faʻaaogaina o le 260 nm ultraviolet moli e le DNA e faʻafeiloaʻi atu i le EB, ma o le EB fusifusia e faʻaalia le fluorescence i le 590 nm i le lanu mumu-lanu moli o le fusi o le malamalama. O le pisia o le gel i le 1 mmol/L MgSO4 solution mo le 1 itula e mafai ona fa'aitiitia ai le fela'ua'iga e mafua mai i le EB e le'i fusia, fa'afaigofie le su'esu'eina o ni vaega laiti o DNA.

O le vali EB e tele ni mea lelei: e faigofie ona fa'aoga, e le motusia ai le nucleic acids, e maualuga lona lagona, ma e mafai ona pisia uma DNA ma RNA. E mafai ona fa'aopoopo le EB ile fa'ata'ita'iga ma siaki ile fa'aogaina ole UV i so'o se taimi. A maeʻa le pisia, e mafai ona aveese le EB e ala i le faʻaaogaina ma le n-butanol.

Peita'i, o le vali EB ose mutagen malosi, ma o puipuiga, e pei o le ofuina o totigilima polyethylene, e tatau ona faia a'o tagofia. O le moli Acridine ose vali e masani ona fa'aoga aua e mafai ona fa'a'ese'ese ai le tasi-stranded ma double-stranded nucleic acids (DNA, RNA). O lo'o fa'aalia ai le fulafula lanu meamata (530 nm) mo vaila'au nucleic fa'a-lua ma le mumu mumu (640 nm) mo vaila'au nucleic tasi. E le gata i lea, o isi vali e pei o le methylene blue, methylene green, ma le quinoline B e mafai ona faʻaaogaina mo le vali.

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