1. Fa'avasegaga
Gel electrophoresis ua vaevaeina i ituaiga tu'usa'o (e aofia ai gels koluma ma gels slab) ma ituaiga fa'ata'atia (tele slab gels) (Ata 6-18). E masani lava, o le vavae ese i luga o le laina e sili atu nai lo le fa'alava, ae o le sauniuniga o le gel fa'ata'atia e le itiiti ifo ma le fa le lelei: o lo'o i ai le lagolago i lalo o le gel atoa, fa'atagaina le fa'aogaina o le agarose maualalo; e mafai ona saunia ipu gel agarose o faʻamatalaga eseese; gel sauniuni ma faʻataʻitaʻiga uta e sili atu ona faigofie; o le potu electrophoresis e faigofie ona fausia ma taugofie. Talu ai o le electrophoresis faalava o loʻo faia i le agarose gel plate o loʻo faʻaofuofu atoatoa e uiga i le 1mm i lalo ifo o le paʻu o le electrophoresis, e taʻua foi o le electrophoresis faʻafefe.
Electrophoresis Tank DYCP-31DN mo agarose gel electrophoresis
2.Buffer System
I le vavaeeseina o le nucleic acid, o le tele o faiga e faʻaaogaina faiga faʻaauau. E masani ona faʻaaogaina faʻamalosi eletise e aofia ai le TBE (0.08mol / L Tris · HCl, pH 8.5, 0.08mol / L boric acid, 0.0024mol / L EDTA) paʻu ma le THE (0.04mol / L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol / L. sodium acetate, 0.0018mol/L EDTA) puipui. O nei pa'u e masani lava ona saunia e pei o le 10x fa'asoa fa'asoa ma fa'afefe i le fa'atonuga mana'omia pe a fa'aoga. Ole fua ole femalagaiga ole DNA laina ma le lapotopoto ile gel agarose e eseese ma le fa'aoga fa'aoga. I totonu ole THE buffer, e sili atu le saoasaoa o femalagaiga o le DNA laina nai lo le DNA lapotopoto, ae i le TBE buffer, o le faafeagai e moni.
3. Sauniuniga o Agarose Gel
(1) Sauniuniga o le Fa'asagaga Agarose Gel
(a) Sauni le fa'atonuga mana'omia ole gel agarose ile fa'aogaina ole 1x electrophoresis buffer.
(e) Fa'avela le agarose ina ia fa'amae'a uma a le o totonu o se ta'ele vai vai, i luga o se fa'aoso fa'amaneta, po'o totonu o se microwave. Fa'alili le vaifofo agarose i le 55°C ma fa'aopopo le vali ethidium bromide (EB) i se fa'amaliega mulimuli o le 0.5 μg/ml.
(i) Fa'amau pito o ipu tioata po'o ipu fa'amalama ma sina vaega o le agarose gel, fa'aopoopo se selu, ma fa'atulaga nifo selu pe a ma le 0.5-1.0 mm i luga a'e o le ipu.
(d) Liligi pea le vaifofo gel agarose ua liusuavai i totonu o le ipu tioata po'o le fa'ailoga (o le mafiafia e fa'alagolago i le tele o le fa'ata'ita'iga DNA), 'alo'ese mai le fa'aofiina o le ea. Fa'amalo fa'anatura ile vevela ole potu.
(e) Aveese ma le faaeteete le selu pe a mae'a ona mafiafia. Fa'aopoopo i ai se aofa'iga talafeagai o le fa'apolopolo eletise i le tane gel, fa'amautinoa o lo'o fa'asusu le ipu gel pe a ma le 1 mm i lalo ifo o le pa'u eletise.
(2) Saunia o le Vertical Agarose Gel
(a) Aveese le ga'o po'o mea o totoe mai ipu tioata e ala ile fufulu ile ethanol.
(e) Fa'anofo ipu va'ava'a i le va o vai i luma ma tua, fa'aoga pito o ipu va'ava'a ma fa'ama'i pito i luma ma tua, ma fa'amau i fa'amau.
(c) Fa'aopoopo le 2% agarose i le 1x pa'u i le va o pito o ipu avanoa e fai ai se polo agarose e 1 cm le maualuga i le pito i lalo o le potu fa'a'aisa gel.
(d) Liligi le gel agarose ua liusuavai i le faʻatonuga manaʻomia, saunia i le 1x paʻu, i totonu o le potu gel e oʻo atu i le 1 cm i lalo ole pito i luga.
(e) Fa'aofi i totonu le selu, 'alofia le maileia o mata'ina o le ea i lalo o nifo selu. O nisi taimi, e ono aliali mai maanuminumi i nifo selu a'o fa'amalūina le gel agarose; i ia tulaga, na o le faaopoopo i ai o ni agarose liusuavai i le pito i luga e faʻamalosia ai.
(f) Aveese le selu. Ina ia puipuia le faʻafefe o le paʻu i totonu o le uta uta, faʻamaufaʻailogaina le fesoʻotaʻiga i le va o le agarose gel plate ma le electrophoresis chamber ma le 2% agarose ma faʻaopopo le aofaʻi manaʻomia o le pa.
(g) Fa'aopoopo 1x electrophoresis pa'u ile potu gel.
(h) Tu'u ma le faaeteete fa'ata'ita'iga DNA i luga o le gel agarose o lo'o i lalo ole pa'u.
O nisi faʻamatalaga e uiga i le malamalama faʻavae e uiga i le electrophoresis gel agarose, o le a matou faʻasoa i le vaiaso a sau. Talosia ia fesoasoani nei fa'amatalaga i lau su'ega.
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Taimi meli: Tes-07-2023